بررسی توانایی ایجاد ریشه های القایی توسط دو سویه Agrobacterium rhizogenes در پنج نوع بافت گیاهی

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 استادیار پژوهش موسسه تحقیقات خاک و آب

2 استاد گروه گیاهپزشگی دانشگاه تربیت مدرس

3 استاد گروه علوم خاک دانشگاه تربیت مدرس

4 دانشیار گروه علوم خاک پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران

5 کارشناس بخش تحقیقات بیولوژی خاک موسسه تحقیقات خاک و آب

چکیده

اگروباکتریوم‌ رایزوژنز از طریق انتقال یک قطعه DNA به نام T-DNA از پلاسمید Ri خود به درون ژنوم سلول گیاه میزبان باعث بوجود آمدن ریشه های موئی در گیاهان دو لپه ای می شود. ریشه های بوجود آمده دارای دو خصوصیت عمده یکی سرعت رشد زیاد و دیگری پایداری ژنتیکی می باشند. دیگر خصوصیت بسیار قابل توجه ریشه‌های القایی توانایی آنها در سنتز هورمونهای رشد و پایداری در محیط های کشت سنتز شده به صورت مستقل از اندام هوایی گیاه می باشد. این توانایی باعث شده است تا ریشه های القایی از طریق جایگزین شدن با ریشه های معمولی گیاه، امکان تکثیر صنعتی قارچهای میکوریز اربسکولار که از انواع میکروارگانیسم های همزیست اجباری با ریشه گیاهان می باشند را بوجود آورند هم اکنون روش کشت همزمان ریشه های القایی و اسپورهای استریل سطحی شده قارچهای میکوریز اربسکولار موفق‌ترین و مقرون به صرفه ترین روش برای تولید صنعتی قارچهای میکوریز اربسکولار در سطح جهانی شناخته شده است. این تحقیق بر مبنای ضرورت تهیه و توسعه کشت ریشه های القایی به عنوان یکی از دو جزء اصلی در روش تکثیر قارچهای میکوریز اربسکولار به طریقه درون شیشه ای به مورد اجراء‌گذاشته شد. برای تهیه ریشه های القایی از دو سویه اگروباکتریوم‌ رایزوژنز به نامهای A4v و A4s و پنج نوع بافت گیاهی شامل دیسک ریشه هویج،‌ برگ گیاهان سیب‌زمینی، لوبیا و نارنج و محور زیر لپه ای گیاهچه نخود استفاده گردید. برای مایه زنی محور زیر لپه ای نخود از کشت 48 ساعته باکتری بر روی محیط YMA و برای بقیه بافتهای گیاهی از سوسپانسیون باکتری تهیه شده در میحط LB و سپس انتقال باکتری به محیط MS با غلظت 107 سلول در هر میلی لیتر استفاده گردید. پس از گذشت دو هفته ریشه‌های القایی بر روی برگ سیب زمینی، لوبیا و محور زیر لپه ای گیاهچه نخود ظاهر گردید. برای حذف آلودگی باکتریایی، ریشه های القاء شده در محیط کشت MS حاوی 500 میلی گرم در لیتر سفوتاکسیم رشد داده شدند. نتایج این تحقیق نشان داد که بافتهای گیاهی دارای حساسیت متفاوتی در برابر مایه زنی با اگروباکتریوم‌ رایزوژنز می باشند به گونه‌ای که محور زیر لپه‌ای نخود بهترین بافت گیاهی و دیسک برگ نارنج نامناسب‌ترین بافت گیاهی برای تولید ریشه‌های القایی تشخیص داده شدند.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Evaluation of the Potentials of Two Strains of Agrobacterium rhizogenes for Producing Induced Root Hairs in Five Different Plant Tissues

نویسندگان [English]

  • FARHAD REJALI 1
  • A. Alizadah 2
  • M. J. Malakouti 3
  • N. Saleh Rastin 4
  • A. Shoaraei Nejati 5
1 Assistant Professor of Soil and Water Reserch Institute
2 Professor, Tarbiat Modarres University
3 Professor, Tarbiat Modarres University
4 Associate Professor, Tehran university
5 Expert of Soil and Water Research Institute
چکیده [English]

Agrobacterium rhizogenes induces the formation of root hairs in dicotyledons by transferring a piece of DNA called T-DNA from its Ri plasmid into the genome of the host plant. Root hairs produced as such display two major characteristics, one being a fast rate of growth, and the other genetic stability. A very interesting characteristic of induced root hairs is their potential to synthesize growth hormones and to survive in synthetic culture media free from shoots. Such a capability has made it possible to multiply Arbescular mycorrhizal fungi, an obligate symbiotic organism on plant roots on industrial scales. Currently, simultaneous culturing of induced root hairs and surface sterilized spores of Arbescular mycorrhizal fungi is the most successful and the most economical method of producing Arbescular mycorrhizal fungi worldwide. This investigation was carried out with the objective of developing and expanding the method of production of induced root hairs as one of the two components of in situ reproduction of Arbescular mycorrhizal fungi. Induced root hairs were prepared using two strains of Agrobacterium rhizogenes, A4V and A4S on five different plant tissues, namely, carrot slices, leaves from potato and bean plants and orange trees, and the sub-cotyledon axis of chickpea seedlings. A culture of bacteria grown on YMA medium for 48 hours was used for inoculating the sub-cotyledon axis of chickpea seedlings, while a bacterial suspension with population densities of 107 cells/ml prepared in LB medium followed by transferring to MS culture was used for inoculating the other four plant tissues. Induced root hairs emerged on potato and bean leaf tissues and on the sub-cotyledon axis of chickpea seedlings. In order to prevent bacterial contaminations, the induced roots were grown in an MS medium that contained 500 mg/liter of cephotaxim. The investigation indicates that the different plant tissues show different levels of response to the inoculation with Agrobacterium rhizogenes, so that the chickpea tissue appeared to be the best while the leaves of orange tree turned out to be the least effective tissue for root hair induction.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Agrobacterium rhizogenes. root hair
  • Arbuscular mycorrhizal fungi

مراجع

  1. Amselem, J. and Tepfer, M. 1992. Molecular basis for novel root phenotypes induced by Agrobacterium rhizogenes A4 on cucumber. Plant Molecular Biology 19: 421-432.
  2. Aoki, S. and Syono, K. 2000. The roles of Rirol and Ngrol genes in hairy root induction in Nicotiana debneyi. Plant Science 159: 183-189.
  3. Armitage, P., Walden, R., and Draper, J. 1988. Vectors for the transformation of plant cell using In: Plant genetic transformation and gene expression. J. Draper, R. Scott, P. Armitage, R. Walden. (eds). Blackwell Scientific Publications. PP. 3-67.
  4. Bhat, S. R., Chitralekha, P. and Chandel, K. P. S. 1992. Regeneration of plants from long-term root culture of lime, citrus aurantifolia (Christm.). swing. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 29: 19-25.
  5. Biondi, S., Lenzi, C., Baraldi, R. and Bagni, N. 1997. Hormonal effects on growth and morphology of normal and hairy roots of Hyoscyamus muticus. Journal of Plant Growth Regulation 16: 159-167.
  6. Boisson-Dernier, A., Chabaud, M., Garcia, F., Becard, G., Rosenberg, C. and Barker, D. G. 2001. Agrobacterium rhizogenes transformed roots of Medicago truncatula for the study of nitrogen-fixing and endomycorrhizal symbiotic associations. Molecular Plant-Microbe Interactions 14(6): 695-700.
  7. Charlotte, H., Hanisch, C., Ramula, K. S., Dijkhuis, P. and Groot, B. 1987. Genetic stability of cultured hairy roots induced by Agrobacterium rhizogenes on tuber disc of potato CV. Bintje. Plant Science 49: 217-222.
  8. Christy, M. C. and Sinclair, B. K. 1992. Regeneration of transgenic kale (Campestris var. rapifera) plants via Agrobacterium rhizogenes mediated transformation. Plant Science 87: 161-169.
  9. Christy, M. C. and Sinclair, B. K. 1992. Regeneration of transgenic kale (Campestris var. rapifera) plants via Agrobacterium rhizogenes mediated transformation. Plant Science 87: 161-169.
  10. Christy, M. C., Sinclair, B. K., Braun, R. H. and Wyke, L. 1997. Regeneration of transgenic vegetable brassicas (Brassica oleracea and B. Campestris) via Ri-mediated transformation. Plant Cell Report 16: 587-593.
  11. Epstein, E., Nissen, S. J. and Sutter, E. G. 1999. Indol-3-acetic acid and indol-3-butyric acid in tissues of carrot inoculated with Agrobacterium rhizogenese. Journal of Plant Growth Regulation 10: 97-100.
  12. Gartland, K. M. A. and Davey, M. R. (eds.). 1995. Agrobacterium Protocols (methods in molecular biology. 44) Human Press. New Jersey 417.
  13. Guellec, V., David, C., Branchard, M. and Tempe, J. 1990. Agrobacterium rhizogenese mediated transformation of grapevine (Vitis vinfera L.). Plant, Cell, Tissue and Organ Culture 20: 211-215.
  14. Hamill, J. D., Parr, A. J., Robins, R. J. and Rhodes, M. J. C. 1986. Secondary product formation by cultures of Beta vulgaris and Nicotiana rustica transformed with Agrobacterium rhizogenes. Plant Cell Report 5: 111-114.
  15. Kamada, H. Okamura, N., Satake, M., Harada, H. and Shimomura, K. 1986. Alkaloid production by hairy root cultures in Atropa belladona. Plant Cell Report 5: 239-249.
  16. Katavic, V., Jelaska, S., Bakran-Petricioli, T. and David. C. 1991. Host-tissue differences in transformation of pumpkin (Cucurbita pepo ) by Agrobacterium rhizogenese. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 24: 35-42.
  17. Kerr, A. 1992. The genus Agrobacterium. In: the prokaryotes, a handbook on the biology of bacteria: ecophysiology. isolation, identification, application. Edited by A, Balows, H. Truper, M, Dworkin, W. Harder and K. H. Schleifer. Second edition, Volume III. Springer Verlag Press Pp. 2214-2235.
  18. Mihaljevic, S. Katavic, V. and Jelaska, S. 1999. Root formation in micropropagated shoots of Sequoia sempervirens using Agrobacterium. Plant Science 141: 73-80.
  19. Momcilovic, , Grubisic, D., Kojic, M. and Neskovic, M. 1997. Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation and plant regeneration of four Gentiana species. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 50: 1-6.
  20. Moyano, E., Fornale, S., Palazon, J., Cusido, R. M., Bonfill, M., Morales, C. and Pinol, M. T. 1999. Effect of Agrobacterium rhizogenese T-DNA on alkaloid production in Solanaceae Phytochemistry 52: 1287-1992.
  21. Mugnier, J. 1988. Establishment of new axenic hairy root lines by inoculation with Agrobacterium rhizogenese. Plant Cell Report 7: 9-12.
  22. Mukundan, U., Dawda, H. G., and Ratnaparkhi, S. 1997. Hairy root culture and secondary metabolic production (Agrobacterium rhizogenes mediated transformed root culture). Agro Botanica Publication, New Delhi PP: 119.
  23. Murashige, T. and Skoog, F. 1962. A revised medium for the rapid growth and bioassay with tobacco tissue culture. Physiol. Plant 15: 473-479.
  24. Noda, T., Tanaka, N., Mano, Y., Nabeshima, S., Okawa, H. and Matsui, C. 1987. Regeneration of horseradish hairy roots incited by Agrobacterium rhizogenes. Plant Cell Report 6: 283-286.
  25. Otani, M. Mii, M. Hand, T., Kamada, H. and Shimada, T. 1993. Transformation of sweet potato (Ipomoea batatas (L.) lam.) Plants by Agrobacterium rhizogenese. Plant Science 94: 151-159.
  26. Ottaviani, M. P., Schel, J. H. N. and Hanishch ten Cate, H. 1990. Variation in structure and plant regeneration of Agrobacterium rhizogenese transformed and control roots of the potato CV. Bintje. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 20: 25-34.
  27. Pellegrineschi, A., and Davolio-Mariani, O. 1996. Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of scented geranium. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 74: 79-86.
  28. Pettenati, J., Chriqui, D., Sarni-Manchapo, P., and Prinsen, E. 1989. Stimulation of lignification in neoformed calli induced by Agrobacterium rhizogenese on bean hypocotyls. Plant Science 61: 179-188.
  29. Ryder, M. H., Tate, M. E. and Kerr, A. 1985. Virulence properties of strains of Agrobacterium on the apical and basal surfaces of carrot root discs. Plant Physiology 77: 215-221.
  30. Somasegaran, P., and Hoben, H. J. 1994. Handbook for rhizobia. Springer-Verlag, New York.
  31. Stummer, B. E., Smith, S. E. and Langridge, P. 1995. Genetic transformation of Verticordia grandis (Myrtaceae) using wild-type Agrobacterium rhizogenes and binary Agrobacterium Plant Science 111: 51-62.
  32. Tanaka, N., Hayakawa, M., Mano, Y., Phkawa, H. and Matsui, C. 1985. Infection of turnip and radish storage roots with Agrobacterium rhizogenes. Plant Cell Report 4: 74-77.
  33. Trypsteen, M., Lijsebettens, M. V., Severen, R. V. and Montagu, M. V. 1991. Agrobacterium rhizogenes mediated transformation of Echinacea purpura. Plant Cell Report 10: 85-89.
  34. Webb, K. J., Jones, S. S., Robbins, M. P. and Minchin, F. R. 1990. Characterization of transgenic plants of Lotus corniculatus. Plant Science 70: 243-256.
پژوهش های خاک
دوره 21، شماره 1
خرداد 1386
صفحه 77-88

فایل ها

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار